目的：建立并比较传统容量分析法、电位滴定法和高效液相色谱法测定乙酰色氨酸含量。方法：传统容量分析法采用酸碱滴定,乙醇作为溶剂,0.1 mol·L^-1氢氧化钠溶液为滴定液,酚酞为指示剂进行滴定。电位滴定法直接参照EP11.0及BP2020中方法。高效液相色谱法采用Agilent 5 TC-C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液(pH 2.3) (17:83),流速为1.0 mL·min^-1,进样量20 μL,柱温为40 ℃,检测波长为220 nm。结果：3种方法测定乙酰色氨酸含量的差异无显著意义,且4批次样品测定结果均在含量限度范围内。结论：电位滴定法和高效液相色谱法均符合方法学验证要求,2种分析方法均能快速、有效地测定乙酰色氨酸的含量,均可作为乙酰色氨酸辅料质量控制的分析方法。